是否为危控品： 否生产企业：上海阿拉丁生化科技股份有限公司 密度：纯度：BioReagent, for western blot储存条件：室温，运输条件：常规运输
中文名：PVDF膜
英文名：PVDF Membrane
纯度：BioReagent，for western blot，WB
货号：P1492692
包装：10EA
存储温度：室温
运输条件：常规运输
稳定性存储：Store at room temperature for 36 months.
产品介绍：
免疫印迹试验，又称Western Blot，是一种将高分辨率凝胶电泳与免疫化学分析相结合的杂交技术。免疫印迹试验的关键为将待测蛋白质固定在基质上用于后续检测。
聚偏氟乙烯（PVDF）膜是典型的免疫印迹膜之一，适用于结合各种蛋白质。PVDF膜材是天然疏水的，且孔结构分布均匀，对蛋白分子有很强的结合能力。阿拉丁转印膜分为0.45μm和0.22μm两种精度，均为疏水性膜。其中精度0.45μm的适用于绝大多数分子量的蛋白，而精度0.22μm的更适合小于20kDa以下的蛋白。
阿拉丁PVDF膜有较高的机械强度，裁切过程中不易产生不规则断裂，兼容化学发光检测和免疫荧光检测。阿拉丁PVDF膜不区分正反面，使用过程中两面均可贴近凝胶。
本说明书提供了一种湿法转印实验方案作为参考。针对不同的蛋白，为了达到最佳转印效果，实验条件可能需要进行适当的调整。
| 货号 | 孔径 | 尺寸 | 包装 |
| P1492692-A01 | 0.22μm | 27.5cm×3.75m | 卷 |
| P1492692-A02 | 0.22μm | 8.4×7cm | 片 |
| P1492692-A03 | 0.22μm | 15×15cm | 片 |
| P1492692-A04 | 0.22μm | 20×20cm | 片 |
| P1492692-B01 | 0.45μm | 27.5cm×3.75m | 卷 |
| P1492692-B02 | 0.45μm | 8.4×7cm | 片 |
| P1492692-B03 | 0.45μm | 15×15cm | 片 |
| P1492692-B04 | 0.45μm | 20×20cm | 片 |
用于Western Blotting推荐材料
| 试剂 | 配制方法 |
| 30% (W/V) 丙烯酰胺单体溶液 | 丙烯酰胺29g，甲叉双丙烯酰胺1g 加去离子水，定容至100mL，调整溶剂pH值不超过7.0，置棕色瓶中，储存于4℃冰箱 |
| 10%过硫酸铵（-20℃保存） | 过硫酸铵1g，加去离子水，定容至10mL，分装，每管1mL，共10管 |
| 1.5M Tris-HCl (pH 8.8) | Tris 18.2g 滴加HCl调pH至6.8，加去离子水，定容至100mL，再次调pH至8.8 |
| 1M Tris-HCl (pH 6.8) | Tris 12.12g 滴加HCl调pH至6.8，加去离子水，定容至100mL，再次调pH至6.8 |
| 10×蛋白电泳缓冲液 | Tris 30g 甘氨酸 144g, pH8.3 SDS 10g 去离子水定容至1000mL |
| 6×SDS上样缓冲液 | 0.5M Tris, pH6.8 0.35M 7.0mL SDS 0.35M 1.0g Glycerol 30%V/V 3.0mL DTT 0.6M 0.93g Bromophenol Blue 0.175mM 1.2mg |
| 转印缓冲液 | 25mM Tris, 192mM甘氨酸, 20% (V/V) 甲醇 溶解3.03g Tris和14.4甘氨酸于500mL去离子水中 再加入200mL甲醇，最终用去离子水定容至1L |
| TBS溶液 | 20mM Tris-HCl, 500mM NaCI 溶解4.84g Tris和58.48g NaCI于1.5L水中，用HCI调节pH到7.5 最终用去离子水定容至2L |
| TBST洗涤缓冲液 | 20mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 0.1%Tween20 向1L TBS溶液中加入1mL Tween20 |
| 封闭缓冲液 | 5%脱脂奶粉-TBS，称量5.0g脱脂奶粉于100mL TBS溶液中，搅拌至溶解 |
| 抗体稀释液 | 5%脱脂奶粉-TBST，称量5.0g脱脂奶粉于100mL TBST溶液中，搅拌至溶解 |
| 一抗（特定于相关蛋白） | 按照供应商提供的说明书使用，通常稀释于抗体稀释液中 |
| 二抗（专为一抗体而设），HRP酶偶联标记 | 按照供应商提供的说明书使用，通常稀释于抗体稀释液中 |
| PVDF膜、滤纸、海绵垫、纯水、100%甲醇 |
使用须知
1、阿拉丁转印膜为疏水性膜，故使用前需要用无水甲醇/无水乙醇进行激活。激活操作为将裁切为需要尺寸的膜用镊子轻轻夹取，放入装有无水甲醇/无水乙醇的容器中，使膜完全被液体覆盖，该过程最好持续1min以上以确保膜整体被激活完全，判定激活成功的标志为膜由白色不透明变为半透明状态，此时可将膜放入转膜液中进行进一步平衡。
2、平衡过程中，膜可能由于表面疏水性的改变停留在液体表面，此时可轻轻用镊子将膜压入转膜液中， 确保无水甲醇/无水乙醇被转膜液完全置换，该过程最好持续1min以上。
3、膜一旦被激活，在后续的转膜及抗体孵育过程中务必保持膜的润湿状态，一旦膜出现变干，将直接影响最后条带的呈现，结果可能出现条带缺失/高背景或其他异常。
使用说明
1、SDS-PAGE电泳
1.1 玻璃板对齐后垂直卡在架子上准备灌胶。
注意：操作时两块玻璃板一定要对齐，以免漏胶。
1.2 按比例配制一定浓度的分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用移液枪吸取沿玻璃板灌胶，待胶面距离玻璃板上端约2cm处即可。然后胶上再加一层水液封，液封后胶凝的更快。
注意：灌胶时，胶一定要沿着玻璃板流下，以免胶中产生气泡。加水液封时要尽量慢一点，以免胶变型。
1.3 当水和胶之间有一条折线时，说明胶已凝固。再等5min使胶充分凝固，就可倒去胶上层水并用滤纸将水吸干。
1.4 按比例配制5%的浓缩胶，加入TEMED后立即摇匀，即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶后将梳子插入浓缩胶中。插梳子时要使梳子保持水平。待浓缩胶充分凝固双手分别捏住梳子两边垂直向上轻轻将其拔出，即可准备电泳。
不同浓度分离胶配比
| 试剂 | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% |
| H₂O (ml) | 3.18 | 2.78 | 2.38 | 1.98 | 1.38 |
| 30%丙烯酰胺(29:1)/mL | 1.2 | 1.6 | 2.0 | 2.4 | 3.0 |
| 1.5M Tris-HCl (pH8.8)/mL | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 10% SDS/μL | 60 | 60 | 60 | 60 | 60 |
| 10% AP(过硫酸铵)/μL | 60 | 60 | 60 | 60 | 60 |
| TEMED/μL | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 |
| 总体积/mL | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 |
| 试剂 | 5%浓缩胶配比 |
| H₂O (ml) | 2 |
| 30%丙烯酰胺(29:1)/mL | 0.5 |
| 1.5M Tris-HCl (pH8.8)/mL | 0.5 |
| 10% SDS/μL | 40 |
| 10% AP(过硫酸铵)/μL | 30 |
| TEMED/μL | 4 |
| 总体积/mL | 3 |
1.5 测量样品中蛋白含量，计算所需蛋白（如1μg, 0.5μg等）的溶液体积即为上样量。取出上样样品至0.5mL离心管，加入6×SDS上样。
1.6 上样前要将样品于沸水浴中煮沸5min，使蛋白变性。
1.7 加入电泳缓冲液，使得电泳液漫过内侧的小玻璃板，开始准备上样。用移液枪贴壁吸取样品，应尽量避免吸入气泡。将移液枪枪头插入加样孔中，缓慢加入样品。
1.8 选择适当的电压进行电泳。一般采用恒压（浓缩胶90V 分离胶150V），电泳至溴酚蓝染料前沿下至凝胶底部大约1cm，即可终止电泳，进行转膜。
2、转膜
2.1 小心取下凝胶，用纯水漂洗，将浓缩胶轻轻刮去，浸入转印缓冲液中平衡5min。
2.2 浸入无水甲醇或无水乙醇1min，观察到整膜由白色不透明变为半透明即可，再浸入转膜缓冲液平衡1min以上备用。
2.3 以比凝胶窄1mm的尺寸裁6张滤纸，浸入转膜缓冲液中备用即可。
2.4 在加有转印液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和活化的膜。
2.5 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。将胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。在膜上盖三层滤纸并除去气泡。最后盖上另一个海绵垫，擀几下即可合起夹子。
注意：整个操作在转印缓冲液中进行，注意避免引入气泡，否则会影响转印效果。
2.6 将夹子放入转移槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，加入1L转印缓冲液。转印槽置于冰水浴中,以免转印时温度过高。
300mA恒流运行30-90min。
注意：推荐使用预染的蛋白Marker来评估转膜的效果。
3、免疫检测
以下是免疫检测的一般方案。关于最佳结果，请参考免疫检测试剂制造商提供的方案。
3.1 将膜用TBST漂洗，去除可能残留的凝胶，膜蛋白面朝上转移至含有封闭液的孵育盒中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h以上，2h最佳。
3.2 弃去孵育盒中的封闭液，加入TBST稀释至适当浓度的一抗，室温下孵育1~2h后（也可放置4℃冰箱中封闭过夜）, 弃去或回收一抗，用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次10min。
3.3 加入TBST稀释至适当浓度的二抗，室温下孵育1~2h后，弃去或回收二抗，用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次10min。
3.4 化学发光、化学显色
建议参照所用试剂说明书操作，使用适当的检测方法对印迹膜成像。
注意事项
本产品仅限于专业人员的科学研究用，临床诊断、治疗或食品、药品等用途未经验证，请谨慎使用。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一-次性手套操作。
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